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Campo DCValorIdioma
dc.contributor.advisor1José Odair Pereira-
dc.creatorGeíza Carmem Batista de Souza-
dc.date.accessioned2016-09-23T14:00:15Z-
dc.date.available2016-09-23T14:00:15Z-
dc.date.issued2009-07-31-
dc.identifier.urihttp://riu.ufam.edu.br/handle/prefix/1216-
dc.description.resumoA mandioca é atacada por mais de 30 agentes causadores de doenças, dentre eles fungos, bactérias e vírus. Alguns destes agentes estão distribuídos em toda parte do mundo onde se tem plantação de mandioca. Microrganismos endofíticos, geralmente fungos e bactérias, vivem sistematicamente no interior das plantas, sem causar aparentemente dano a seus hospedeiros. Os marcadores moleculares de DNA têm sido utilizados com sucesso para identificar espécies de fungos ou linhagens intraespecíficas. Assim, com o objetivo de identificar em nível de espécie, os fungos isolados de folhas, caules e raízes de mandioca (Manihot esculenta Crantz.) por meio de marcadores moleculares da região ITS do DNA ribossomal, serão selecionados endófitos que se encontram armazenados em água pelo método de Castelani. Fragmentos serão inoculados em meio BDA, em placas de Petri, para crescimento vegetativo, esporulação e obtenção de culturas monospóricas por meio de diluição seriada. Após a esporulação, pequenos discos com micélio e esporos serão transferidos para Erlenmeyer contendo 100mL de meio batata-dextrose, acondicionados à temperatura ambiente por um período de dez dias para crescimento micelial e posterior extração. A extração de DNA genômico será realizada pelo método fenol/clorofórmio, para desnaturação e precipitação de proteínas, o tampão de extração (SDS), para rompimento da membrana celular, NaCl e etanol 100% para a precipitação do DNA, etanol 70% para limpeza do DNA e o Tris-HCl e EDTA, para estabilizar o pH da solução em 8 e para reduzir o efeito indesejável da oxidação de compostos fenólicos, respectivamente. Na fase de quantificação do DNA, será estimada a sua concentração com 2µL do DNA e 3µL do tampão da amostra (5X). A quantificação será realizada por eletroforese em gel de agarose 0,8%, corado com brometo de etídio, a leitura realizada pela intensidade de fluorescência num fotodocumentador de imagens com luz ultravioleta. A amplificação de parte do DNA ribossomal de cada indivíduo será realizada via PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) utilizando-se o par de primers ITS1 5 TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3 e ITS2 5 GCTGCGTTCTTCATCGATGC 3 , que corresponde ao fragmento 3 da subunidade menor do rDNA, a região 5,8S do rDNA e as regiões espaçadoras internas (ITS) 1 e 2 contendo 1600 pares de bases. Os produtos da amplificação serão submetidos à eletroforese horizontal em gel de agarose 1,0%. Os produtos não incorporados na reação de amplificação serão eliminados utilizando-se o Kit de purificação GFX (Amersham Biosciences) e a purificação do produto amplificado será realizada de acordo com as especificações do fabricante. Todas as amostras serão seqüenciadas, utilizando os iniciadores ITS1 e ITS2, em seqüenciador automático MegaBACE 1000, para a conferência e edição entre as seqüências de cada reação e alinhamento no programa Clustal W (BioEdit) e submetidas no BLAST para uma busca de seqüência armazenada.pt_BR
dc.description.sponsorshipCNPQpt_BR
dc.formatPDF-
dc.languagept_BRpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal do Amazonaspt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentCiências Fund. Des. Agrícolapt_BR
dc.publisher.departmentFaculdade de Ciências Agráriaspt_BR
dc.publisher.programPrograma PIBIC 2008pt_BR
dc.publisher.initialsUFAMpt_BR
dc.rightsAcesso Restritopt_BR
dc.subjectMandioca-
dc.subjectendófitos-
dc.subjectDNA ribossomal-
dc.subject.cnpqCIÊNCIAS BIOLÓGICAS: BIOLOGIA GERALpt_BR
dc.titleIdentificação de Fungos Endofíticos Isolados de Manihot esculenta Crantz., utilizando marcador molecular ITSpt_BR
dc.typeRelatório de Pesquisapt_BR
dc.pibic.cursoCiências Biológicas - Licenciaturapt_BR
dc.pibic.nrprojetoPIB-B/0007/2008-
dc.pibic.projetoIdentificação de Fungos Endofíticos Isolados de Manihot esculenta Crantz., utilizando marcador molecular ITS-
dc.pibic.dtinicio2008-08-01-
dc.pibic.dtfim2009-07-31-
dc.contributor.colaboradorRozana de Medeiros Souza Galvão-
dc.contributor.colaboradorAline Christien de Figueiredo Rondon-
dc.contributor.Latteshttp://lattes.cnpq.br/7936210246892061-
Aparece nas coleções:Relatórios finais de Iniciação Científica - Ciências Biológicas

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